HiChIP技术,全称为:in situ Hi-C followed by chromatin immunoprecipitation,由斯坦福大学Howard Chang实验室于2016年开发,并于《Nature Methods》上发表的一种用于研究(Mumbach et al., 2016)特定蛋白介导的全基因组DNA-DNA相互作用的技术。该技术首先进行细胞核内原位基因组DNA消化和邻近连接,再用特异的抗体富集目的蛋白介导的完成邻近连接的嵌合DNA分子,进而在全基因组范围内精确地识别目的蛋白的DNA顺式调控元件及其在三维空间中的组织方式。
HiChIP融合了Hi-C和ChIA-PET技术的优势,并借助转座酶介导的文库构建方法,在较低的数据量下实现更高分辨率的染色质三维结构解析。HiChIP技术凭借其高效、灵敏和低样本需求的特点,已成为研究染色质三维结构和基因调控机制的重要工具。
HiChIP技术,文库构建主要分为以下步骤:
1. 用甲醛铰链DNA和蛋白,目的是让可能存在相互影响的DNA片段连接;
2. 用超声等方法将DNA片段化;
3. 用特异性蛋白抗体富集DNA和蛋白复合物;
4. 在DNA片段末端加上包含MmeI位点的生物素化寡核苷酸linker;
5. 连接linker,从而形成连接目的DNA片段的桥梁;
6. 用限制性内切酶消化得到DNA片段,去除蛋白质;
7. 固定化PET序列;
8. 上机测序。

一、细胞样品
反应所需细胞应大于10million/管(每个样本准备2~3管),具体细节详询销售。
二、动物组织
选取新鲜组织,质量大于100mg/份,取样时剔除冗余部分,保证组织的单一性,建议取材后用生理盐水漂洗,以去除血渍和污物,液氮速冻,-80℃保存。建议样品制备 2~3 份。
三、植物组织
选取取幼嫩组织,如嫩叶,根尖,幼苗等,质量大于5g/份,建议取样后用清水漂洗去除污物,纸巾吸干水分后液氮速冻,-80℃保存。建议样品制备 2~3 份。