单细胞生物学技术
单细胞CUT&Tag

单细胞 CUT&Tag (Single-cell Cleavage UnderTargetsAnd Tagmentation)是一种在单个细胞中高灵敏度检测蛋白质(如组蛋白修饰或转录因子)与DNA结合位点互作关系的新方法。

通过温和裂解细胞膜,使抗体和酶进入核内,抗体特异性结合目标蛋白并连接ProteinA-Tn5形成转座酶复合体。Tn5在抗体标记的染色质区域附近切割DNA并插入测序接头,通过微流控或微孔板分离单细胞,添加细胞特异性barcode。PCR扩增后进行测序,通过barcode区分细胞来源,解析单细胞水平的蛋白-DNA互作图谱。

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单细胞CUT-Tag,文库构建主要分以下步骤:

1、单细胞(核)分离

2、通透

3、抗体-Tn5孵育

4、液滴生成

5、文库构建

6、测序

7、数据分析

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