FISH技术,全称为:fluorescence in situ hybridization。20世纪70年代,人们开始使用荧光标记的原位杂交,即FISH技术。它是一种关键的非放射性原位杂交技术。该技术是一种将分子生物学技术与细胞遗传学技术相结合的实验手段。该技术利用荧光标记的特定核酸探针,与细胞或组织切片中的靶标DNA或RNA序列进行原位杂交,通过荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察杂交信号,从而实现对靶标分子在细胞内的定性、定位及相对定量分析。FISH技术的荧光试剂和探针经济、安全。探针稳定,一次标记后…
scRNA-seq技术,全称为:singlecell RNA sequencing,2009年Tang等人在《Nature Methods》发表了题为“mRNA-seq: whole-transcriptome analysis of a single cell”的论文,首次实现了单个细胞全转录组的分析,标志着单细胞RNA-Seq技术的诞生。scRNA-Seq是在单细胞水平对转录组进行测序的一项技术。scRNA-seq技术通过微流控技术分选单个细胞,然后将带有barcode和引物的胶珠与单个细胞包裹在油滴中,并在中完成细胞的裂解以及mRNA的捕获,随后mRNA逆转录最终生成含有Borcode和UMI的cD…
HiChIP技术,全称为:in situ Hi-C followed by chromatin immunoprecipitation,由斯坦福大学Howard Chang实验室于2016年开发,并于《Nature Methods》上发表的一种用于研究(Mumbach et al., 2016)特定蛋白介导的全基因组DNA-DNA相互作用的技术。该技术首先进行细胞核内原位基因组DNA消化和邻近连接,再用特异的抗体富集目的蛋白介导的完成邻近连接的嵌合DNA分子,进而在全基因组范围内精确地识别目的蛋白的DNA顺式调控元件及其在三维空间中的组织方式。 HiChIP融合了Hi-C和ChIA-PE…
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation, CUT&Tag)是一种研究蛋白质与DNA互作的新方法。该方法通过分子生物学手段将高活性的Tn5转座酶与Protein A融合,并装载建库接头引物形成pA-Tn5转座复合物。在抗体的引导下该pA-Tn5转座复合物可靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。 与传统ChIP-Seq相比,该技术无需交联与超声打断操作,规避了抗原决定簇遮盖和样本损失问题,提高了信噪比,所需细胞量减少(可低至60个)。与CUT&Run相比,该技术在pA-Tn5转座复合物进行切割时…
ATAC-Seq技术,全称为:Assay for Transposase-Accessible Chromatin with high throughput sequencing),是2013年由斯坦福大学William J. Greenleaf和Howard Y. Chang实验室开发的一种用于研究染色质可及性(通常也理解为染色质的开放性)的方法(Buenrostro, Giresi, Zaba, Chang, & Greenleaf, 2013)。该方法通过超活化Tn5转座酶将序列接头插入到染色质开放区域,然后通过DNA测序数据分析推断染色质各区域的可及性、转录因子结合位点以及核小体位置。ATAC-Seq可以在全基因组范围…