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IF(免疫荧光染色)
IF(免疫荧光染色)
IF技术,全称为:Immunofluorescence。它是一种能够在细胞或组织切片中通过荧光标记的抗体检测并定位特定蛋白质的技术。该技术通过特异性抗体(称为一抗)识别目标蛋白(抗原)。然后使用带有荧光标记的二抗与一抗结合,二抗带有荧光团,能在荧光显微镜下发出特定波长的光。之后通过荧光显微镜激发荧光团发出光信号,可以观察目标蛋白在样本中的表达位置和相对丰度。 IF技术分辨率高,可实现亚细胞层面的精准定位,尤其适合研究抗原在细胞器或细胞骨架中的分布,且荧光信号可通过软件进行三…
FISH(荧光原位杂交)
FISH(荧光原位杂交)
FISH技术,全称为:fluorescence in situ hybridization。20世纪70年代,人们开始使用荧光标记的原位杂交,即FISH技术。它是一种关键的非放射性原位杂交技术。该技术是一种将分子生物学技术与细胞遗传学技术相结合的实验手段。该技术利用荧光标记的特定核酸探针,与细胞或组织切片中的靶标DNA或RNA序列进行原位杂交,通过荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察杂交信号,从而实现对靶标分子在细胞内的定性、定位及相对定量分析。FISH技术的荧光试剂和探针经济、安全。探针稳定,一次标记后…
RNA-Seq
RNA-Seq
RNA-Seq技术,全称为:RNA sequencing。是一种利用高通量测序技术(NGS)对生物样本中所有转录产物(RNA)进行全面、快速测序的技术。该技术通常利用mRNA特有的“尾巴”(polyA尾)将其从总RNA中分离出来。然后将mRNA反转录成更稳定的cDNA。在cDNA片段两端连接上特定的短二代测序接头,随后进行后续的建库、测序和分析。 RNA-Seq数据能鉴定到几乎所有种类的转录本;确定基因的转录结构;并且在不同处理条件下量化每个转录本的表达水平。RNA-Seq能无偏绘制高分辨率全球转录组图谱,它允许…
单细胞转录组技术
单细胞转录组技术
scRNA-seq技术,全称为:singlecell RNA sequencing,2009年Tang等人在《Nature Methods》发表了题为“mRNA-seq: whole-transcriptome analysis of a single cell”的论文,首次实现了单个细胞全转录组的分析,标志着单细胞RNA-Seq技术的诞生。scRNA-Seq是在单细胞水平对转录组进行测序的一项技术。scRNA-seq技术通过微流控技术分选单个细胞,然后将带有barcode和引物的胶珠与单个细胞包裹在油滴中,并在中完成细胞的裂解以及mRNA的捕获,随后mRNA逆转录最终生成含有Borcode和UMI的cD…
单细胞ATAC-Seq
单细胞ATAC-Seq
单细胞ATAC-seq技术,全称为:Single-Cell Assay for Transposase - Accessible Chromatin using sequencing。是一种用于探索单个细胞水平上染色质可及性的高通量测序技术。该技术通过转座酶将测序接头插入到每个细胞内染色质的开放区域,然后将每个细胞分配到带有唯一barcode引物的液滴中,使得每个细胞中的开放染色质区DNA都带有唯一的 barcode。并将打断后的染色质DNA收集在一起,进行后续的建库、测序和分析。 bulk ATAC-seq通常是针对整个的个体而言,反应的是数千个细胞的平均染…
单细胞CUT&Tag
单细胞CUT&Tag
单细胞 CUT&Tag (Single-cell Cleavage UnderTargetsAnd Tagmentation)是一种在单个细胞中高灵敏度检测蛋白质(如组蛋白修饰或转录因子)与DNA结合位点互作关系的新方法。通过温和裂解细胞膜,使抗体和酶进入核内,抗体特异性结合目标蛋白并连接ProteinA-Tn5形成转座酶复合体。Tn5在抗体标记的染色质区域附近切割DNA并插入测序接头,通过微流控或微孔板分离单细胞,添加细胞特异性barcode。PCR扩增后进行测序,通过barcode区分细胞来源,解析单细胞水平的蛋白-DNA互作图谱。…
HiChIP
HiChIP
HiChIP技术,全称为:in situ Hi-C followed by chromatin immunoprecipitation,由斯坦福大学Howard Chang实验室于2016年开发,并于《Nature Methods》上发表的一种用于研究(Mumbach et al., 2016)特定蛋白介导的全基因组DNA-DNA相互作用的技术。该技术首先进行细胞核内原位基因组DNA消化和邻近连接,再用特异的抗体富集目的蛋白介导的完成邻近连接的嵌合DNA分子,进而在全基因组范围内精确地识别目的蛋白的DNA顺式调控元件及其在三维空间中的组织方式。 HiChIP融合了Hi-C和ChIA-PE…
Hi-C
Hi-C
Hi-C(High-throughput chromosome conformation capture),高通量染色质构象捕获技术研究全基因组范围内整个染色质在空间位置上的关系,获得高分辨率的染色质调控元件相互作用图谱,更加全面阐述染色质三维结构。同样,Hi-C 可以与 RNA-Seq、ChIP-Seq等多组学数据进行联合分析,进而从基因调控网络和表观遗传网络来阐述生物体性状形成的相关机制。
ChRD-PET
ChRD-PET
ChRD-PET(Chromatin-associated RNA-DNA interactions followed by paired-end-tag sequencing), 一种植物RNA-DNA互作研究技术,其主要原理是利用特异组蛋白修饰抗体,通过染色质免疫共沉淀富集DNA-RNA-蛋白质复合物,用一种生物素标记的DNA bridge linker,将复合物上空间接近的RNA和DNA进行连接,通过高通量测序获得DNA和RNA交互的数据。利用这一技术,研究人员构建了水稻H3 ChRD-PET和H3K4me3 ChRD-PET数据,分别表征染色质结合RNA在全基因组上的结合位点,以及染色质结合RNA与H3…
ChIA-PET
ChIA-PET
ChIA-PET技术,全称为:Chromatin Interaction Analysis by Patred-End sequencing,由2009年新加坡基因组研究院的阮一骏教授研究组在《Nature》上首次发表,是一种鉴定目的蛋白介导的全基因组DNA调控元件远程相互作用的高效技术。该技术是染色质免疫沉淀技术(ChIP)和邻近连接(proximity ligation) 的组合,利用能识别目的蛋白的特异抗体,通过染色质免疫共沉淀技术,特异性地富集目的蛋白和DNA的复合体;然后对复合体中的DNA进行末端修饰和临近连接,将线性距离较远、但空间上临近的两…
WGBS
WGBS
WGBS技术,全称为:Whole Genome Bisulfite Sequencing,2008年3月Shawn J. Cokus和Suhua Feng首次用WGBS对拟南芥全基因组甲基化水平进行了测定(Shawn J. Cokuset al., 2008),它是一种单碱基分辨率鉴定全基因组范围内DNA甲基化水平的技术。该技术主要通过对DNA样本进行亚硫酸盐处理,未甲基化的胞嘧啶(C)被亚硫酸盐转化为尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶则不受影响。转化后的DNA随后进行文库构建和高通量测序,通过比较处理后的DNA序列与参考基因组序列的差异,可以准确地定位和量化DN…
ChIP-Seq
ChIP-Seq
ChIP-Seq(染色质免疫沉淀测序)是一种强大的技术,用于研究蛋白质如转录因子和组蛋白修饰与DNA的相互作用。通过这种技术,研究人员能够全面理解基因表达的调控机制,揭示细胞内的分子事件和疾病发生的分子基础。本科研服务旨在为广大科研工作者提供高质量的ChIP-seq实验和数据分析服务,从而加速科研进展和成果的产出。一、服务介绍1. 实验设计咨询提供个性化实验设计方案,根据研究目的和样本类型选择最合适的ChIP-seq策略。确定目标蛋白质和相应的特异性抗体。2. 样本处理接收多种类…
CUT&Tag
CUT&Tag
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation, CUT&Tag)是一种研究蛋白质与DNA互作的新方法。该方法通过分子生物学手段将高活性的Tn5转座酶与Protein A融合,并装载建库接头引物形成pA-Tn5转座复合物。在抗体的引导下该pA-Tn5转座复合物可靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。 与传统ChIP-Seq相比,该技术无需交联与超声打断操作,规避了抗原决定簇遮盖和样本损失问题,提高了信噪比,所需细胞量减少(可低至60个)。与CUT&Run相比,该技术在pA-Tn5转座复合物进行切割时…
ATAC-Seq
ATAC-Seq
ATAC-Seq技术,全称为:Assay for Transposase-Accessible Chromatin with high throughput sequencing),是2013年由斯坦福大学William J. Greenleaf和Howard Y. Chang实验室开发的一种用于研究染色质可及性(通常也理解为染色质的开放性)的方法(Buenrostro, Giresi, Zaba, Chang, & Greenleaf, 2013)。该方法通过超活化Tn5转座酶将序列接头插入到染色质开放区域,然后通过DNA测序数据分析推断染色质各区域的可及性、转录因子结合位点以及核小体位置。ATAC-Seq可以在全基因组范围…
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